Plasmide CRISPR d'Activation (h) U2AF35: sc-404986-ACT

Le gène humain **U2AF1** code **U2AF35**, un composant central du facteur d’épissage auxiliaire U2, qui reconnaît le site d’épissage 3′ et contribue au recrutement de l’U2 snRNP lors de l’assemblage du spliceosome. En s’associant à **U2AF2 (U2AF65)** et en interagissant avec les tractus polypyrimidiques et les caractéristiques des jonctions d’épissage, U2AF35 participe aux décisions d’épissage alternatif qui déterminent la production d’isoformes d’ARNm, la stabilité des transcrits et la diversité protéique. Les programmes d’épissage dépendants d’U2AF1 s’entrecroisent avec la maturation des ARN, le couplage à la transcription et le contrôle du cycle cellulaire, ce qui en fait un nœud clé de la régulation génique post-transcriptionnelle. Des altérations récurrentes d’U2AF1 et des signatures d’épissage dérégulées sont associées à la biologie des hémopathies malignes et, plus largement, à des perturbations des voies d’épissage des ARN, ce qui soutient son utilisation dans des études mécanistiques du fonctionnement du spliceosome et des changements d’épissage pertinents pour la maladie.

U2AF35 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de U2AF1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

U2AF35 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus U2AF1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription U2AF1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de U2AF35. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus U2AF1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de U2AF35 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie U2AF35 dans les cellules tumorales présentant une expression de U2AF1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.