Twinkle Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404159

Descripción general

TWNK codifica Twinkle, una helicasa de ADN mitocondrial esencial para la replicación del ADNmt y el mantenimiento de los nucleoides, que actúa junto con el replisoma mitocondrial para sostener la capacidad de fosforilación oxidativa. Al desenrollar el ADNmt de doble hebra durante la replicación, Twinkle ayuda a preservar el número de copias de ADNmt y la integridad del genoma, influyendo en la transcripción mitocondrial, la biogénesis de la cadena respiratoria y la homeostasis energética celular. Las alteraciones de TWNK se asocian con inestabilidad del genoma mitocondrial, incluida la depleción de ADNmt o múltiples deleciones, y con fenotipos de enfermedades mitocondriales neuromusculares y neurodegenerativas. Por ello, los estudios de pérdida de función de TWNK son relevantes para investigar la señalización de estrés mitocondrial, la remodelación bioenergética y las respuestas al daño del ADNmt asociado a la replicación.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Twinkle (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen TWNK en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del TWNK junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de TWNK tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Twinkle.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en TWNK para la investigación de la señalización de Twinkle, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de TWNK críticos para la función de Twinkle
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de TWNK para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Twinkle CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Twinkle CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus TWNK. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Twinkle (h) y el plásmido HDR Twinkle (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología TWNK para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana TWNK definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.