TSGA2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423525

Panoramica

Rsph1 codifica un componente della testa del raggio radiale necessario per una corretta architettura dell’assonema e per il battito coordinato di ciglia e flagelli, supportando la ciliogenesi motile e il trasporto basato sui microtubuli negli epiteli multiciliati. Attraverso il suo ruolo nell’assonema 9+2, RSPH1 contribuisce a vie che regolano la clearance mucociliare e la motilità degli spermatozoi, collegando la sua funzione all’omeostasi delle vie aeree e alla biologia riproduttiva. L’alterazione delle proteine dei raggi radiali è associata a fenotipi di discinesia ciliare primaria, inclusi malattia respiratoria cronica e difetti di lateralità, rendendo Rsph1 un locus utile per lo studio di processi di sviluppo e infiammatori guidati dalle ciglia. Nei modelli murini, la perturbazione di Rsph1 consente un’analisi meccanicistica delle relazioni struttura–funzione delle ciglia motili nei tessuti respiratori e riproduttivi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TSGA2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Rsph1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Rsph1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Rsph1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TSGA2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Rsph1 per lo studio della segnalazione di TSGA2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Rsph1 critici per la funzione di TSGA2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Rsph1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TSGA2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal TSGA2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Rsph1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TSGA2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR TSGA2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Rsph1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Rsph1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.