Troponin I-FS Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423458

Visão geral

Tnni2 codifica a troponina I do músculo esquelético de contração rápida (Troponina I-FS), a subunidade inibitória do complexo de troponina que acopla sinais de Ca²⁺ ao ciclo de pontes cruzadas actina–miosina durante a contração. Ao regular a ativação dos filamentos finos por meio de interações com a troponina T, a troponina C e a tropomiosina, a Troponina I-FS ajuda a determinar a cinética de contração, o relaxamento e a produção de força em miofibras de contração rápida. Este gene é parte integrante do acoplamento excitação–contração dependente de cálcio e da organização do sarcômero, tornando-o relevante para estudos de desenvolvimento muscular, especificação de tipos de fibra e remodelamento dependente da atividade. Alterações na regulação da troponina estão associadas a miopatias esqueléticas e disfunção contrátil, e a perturbação de Tnni2 fornece um modelo acessível para dissecar mecanismos sarcoméricos subjacentes a fenótipos de fraqueza muscular.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Troponin I-FS (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Tnni2 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Tnni2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Tnni2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Troponin I-FS.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Tnni2 para a investigação da sinalização de Troponin I-FS, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Tnni2 críticos para a função Troponin I-FS
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Tnni2 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Troponin I-FS Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo Troponin I-FS Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Tnni2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Troponin I-FS Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR Troponin I-FS (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Tnni2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Tnni2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.