Troponin I-FS CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423458

Übersicht

Tnni2 kodiert das Troponin I der schnellen Skelettmuskulatur (Troponin I-FS), die inhibitorische Untereinheit des Troponin-Komplexes, der Ca²⁺-Signale während der Kontraktion mit dem Aktin-Myosin-Querbrückenzyklus koppelt. Durch die Regulation der Aktivierung der dünnen Filamente über Wechselwirkungen mit Troponin T, Troponin C und Tropomyosin trägt Troponin I-FS dazu bei, Kontraktionskinetik, Relaxation und Kraftentwicklung in schnellzuckenden Muskelfasern festzulegen. Dieses Gen ist ein integraler Bestandteil der calciumabhängigen Erregungs-Kontraktions-Kopplung und der Sarkomerorganisation und ist daher relevant für Studien zur Muskelentwicklung, zur Festlegung von Fasertypen und zum aktivitätsabhängigen Remodeling. Eine veränderte Troponin-Regulation wird mit Skelettmyopathien und kontraktiler Dysfunktion in Verbindung gebracht, und eine Störung von Tnni2 stellt ein gut handhabbares Modell dar, um sarkomerische Mechanismen zu untersuchen, die Muskelweakness-Phänotypen zugrunde liegen.

Das Troponin I-FS CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Tnni2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Tnni2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Tnni2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Troponin I-FS-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Tnni2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Troponin I-FS-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Tnni2-Exone abzielen, die für die Troponin I-FS-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Tnni2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Troponin I-FS CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Troponin I-FS CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Tnni2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Troponin I-FS HDR-Plasmid (m) und Troponin I-FS HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Tnni2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Tnni2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.