Troponin I-FS Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401530

Descripción general

TNNI2 codifica la troponina I del músculo esquelético de contracción rápida (Troponina I-FS), la subunidad inhibidora del complejo de troponina que regula las interacciones actina–miosina de manera dependiente de Ca²⁺. Al unirse a la tropomiosina y a la actina, la Troponina I-FS ayuda a conmutar el filamento fino entre los estados relajado y contráctil, aguas abajo del acoplamiento excitación–contracción sarcomérico. La actividad de TNNI2 se integra con la señalización del calcio, la miofibrilogénesis y los programas contráctiles específicos del tipo de fibra muscular que determinan la producción de fuerza y la resistencia a la fatiga. Las alteraciones genéticas que afectan la regulación de la troponina y la función del sarcómero se asocian con fenotipos hereditarios de contractura y miopatía del músculo esquelético, por lo que TNNI2 es una diana relevante para estudios mecanísticos de la fisiología muscular y de defectos contráctiles asociados a enfermedad.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Troponin I-FS (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen TNNI2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del TNNI2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de TNNI2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Troponin I-FS.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en TNNI2 para la investigación de la señalización de Troponin I-FS, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de TNNI2 críticos para la función de Troponin I-FS
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de TNNI2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Troponin I-FS CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Troponin I-FS CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus TNNI2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Troponin I-FS (h) y el plásmido HDR Troponin I-FS (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología TNNI2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana TNNI2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.