tropomodulin 3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405617

Descripción general

TMOD3 codifica tropomodulina 3, una proteína que tapa el extremo “pointed” (extremo puntiagudo) de los filamentos de actina y regula su longitud y estabilidad, apoyando la organización de la actina cortical, la forma celular y las propiedades mecánicas. Al modular la dinámica de la actina, TMOD3 contribuye a procesos de remodelación del citoesqueleto como la migración celular, la adhesión y la citocinesis, y se relaciona funcionalmente con vías que regulan el tráfico de membranas y la contractilidad actomiosínica. La alteración de la regulación de la actina se ha implicado en diversos contextos patológicos en los que se perturba la organización del citoesqueleto, incluida la invasión de células cancerosas y la disfunción de células hematológicas, lo que convierte a TMOD3 en un nodo útil para estudiar fenotipos dependientes del citoesqueleto. TMOD3 también es relevante para investigar la arquitectura de células eritroides e inmunitarias, donde se requiere un control preciso de los filamentos de actina para un funcionamiento celular normal.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO tropomodulin 3 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen TMOD3 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del TMOD3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de TMOD3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína tropomodulin 3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en TMOD3 para la investigación de la señalización de tropomodulin 3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de TMOD3 críticos para la función de tropomodulin 3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de TMOD3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido tropomodulin 3 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido tropomodulin 3 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus TMOD3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR tropomodulin 3 (h) y el plásmido HDR tropomodulin 3 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología TMOD3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana TMOD3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.