TRIM8 Plasmide Double Nickase (m): sc-429995-NIC

Trim8 codifica TRIM8, una ligasi E3 dell’ubiquitina di tipo RING appartenente alla famiglia TRIM, che regola la stabilità proteica e la segnalazione attraverso meccanismi dipendenti dall’ubiquitina. Nelle cellule di topo, TRIM8 è stata collegata alla modulazione di importanti vie di risposta allo stress e infiammatorie, incluse le risposte associate a p53, la segnalazione NF-κB e gli output della via JAK/STAT, influenzando proliferazione, apoptosi e programmi trascrizionali guidati dalle citochine. Per questi ruoli, TRIM8 è spesso studiata in contesti di integrità del genoma, regolazione dell’immunità innata e decisioni sul destino cellulare. Un’attività di TRIM8 deregolata è stata associata a processi patologici che coinvolgono una segnalazione infiammatoria aberrante e un’alterata funzione delle reti di soppressori tumorali, a sostegno della sua rilevanza nella ricerca su modelli di malattia.

TRIM8 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Trim8 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Trim8. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Trim8. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Trim8 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.