TRIM8 Plasmide Double Nickase (h): sc-404916-NIC

TRIM8 (tripartite motif contenente 8) codifica una ligasi E3 dell’ubiquitina di tipo RING che regola il turnover proteico e l’ampiezza della segnalazione nelle vie dell’immunità innata e della risposta allo stress. TRIM8 è stato collegato alla modulazione della segnalazione associata a NF-κB e agli interferoni e può influenzare programmi trascrizionali attraverso il controllo, dipendente dall’ubiquitina, di componenti delle vie di segnalazione e di fattori nucleari. Nel nucleo e nel citoplasma, TRIM8 contribuisce al controllo qualità delle proteine e alla regolazione, dipendente dal contesto, delle risposte legate al ciclo cellulare e all’apoptosi. Alterazioni dell’espressione o della funzione di TRIM8 sono state associate a fenotipi neuroevolutivi e renali, a supporto della sua rilevanza per studi meccanicistici sulla segnalazione dell’ubiquitina e sulla regolazione dell’infiammazione.

TRIM8 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus TRIM8 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di TRIM8. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di TRIM8. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con TRIM8 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.