TRIM14 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h2): sc-405847-ACT-2

O TRIM14 humano (tripartite motif-containing 14) codifica um adaptador citosólico da família TRIM implicado na regulação da imunidade inata, no qual atua como uma proteína de sustentação (scaffold) de complexos de sinalização que modulam a indução de interferon tipo I e programas transcricionais inflamatórios a jusante de receptores de reconhecimento de padrões (PRRs). O TRIM14 participa de vias de defesa antiviral ao influenciar a propagação de sinais dependente de ubiquitina e a estabilidade ou atividade de mediadores-chave, como componentes associados a cGAS–STING, MAVS e NF-κB, moldando a produção de citocinas e a expressão de genes estimulados por interferon. A sinalização desregulada de TRIM14 tem sido associada a respostas hospedeiro–patógeno alteradas e a fisiopatologia ligada ao sistema imune, incluindo inflamação crônica e contextos relevantes para a evasão imune do câncer. Ferramentas de edição do gene TRIM14 e de genômica funcional dão suporte a estudos mecanísticos da sinalização de PRRs, do crosstalk com a via da ubiquitina e de redes transcricionais impulsionadas por interferon em células humanas.

TRIM14 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h2) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TRIM14 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TRIM14 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h2) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TRIM14 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TRIM14, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TRIM14. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TRIM14 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TRIM14 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TRIM14 em células tumorais com expressão de TRIM14 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.