Partículas Lentivirales de Activación (h) TRAC-1: sc-409980-LAC

RNF125 codifica TRAC-1, una ligasa E3 de ubiquitina tipo RING que modula la señalización inmunitaria al controlar el recambio dependiente de ubiquitina y la actividad de proteínas clave de señalización. Se ha implicado a TRAC-1 en la regulación de vías impulsadas por el receptor de células T y por citocinas, ajustando los umbrales de activación, la proliferación de linfocitos y las respuestas inflamatorias mediante la proteostasis y programas transcripcionales aguas abajo. Al influir en la dinámica de ubiquitinación, RNF125 puede afectar respuestas celulares vinculadas a la inmunidad innata y adaptativa, incluida la señalización asociada al interferón. La actividad desregulada de RNF125/TRAC-1 se ha asociado con disfunción inmunitaria y mecanismos de enfermedad inflamatoria, lo que la hace relevante para desentrañar los circuitos de señalización en modelos celulares humanos inmunitarios y relacionados con el sistema inmune.

Las partículas de activación lentiviral TRAC-1 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de RNF125 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral TRAC-1 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción RNF125, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de TRAC-1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo RNF125 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.