TMPRSS11A Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-415530-ACT

TMPRSS11A codifica uma protease serina transmembrana do tipo II, que se localiza na superfície celular e participa da proteólise pericelular em interfaces epiteliais. Ao clivar substratos extracelulares e associados à membrana, o TMPRSS11A pode influenciar programas de diferenciação epitelial, a manutenção da barreira e redes de sinalização ativadas por proteases que moldam a remodelação tecidual e as respostas inflamatórias. Sua atividade interage com cascatas mais amplas de proteases serina e pode modular a disponibilidade de peptídeos bioativos e de sinais relacionados a fatores de crescimento no microambiente local. A expressão desregulada de proteases serina ancoradas à membrana, incluindo TMPRSS11A, tem sido associada a alterações na biologia das vias aéreas e das mucosas e tem sido investigada no contexto da fisiopatologia epitelial e da remodelação de proteases relacionada ao câncer.

TMPRSS11A O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TMPRSS11A sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TMPRSS11A O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TMPRSS11A em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TMPRSS11A, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TMPRSS11A. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TMPRSS11A nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TMPRSS11A no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TMPRSS11A em células tumorais com expressão de TMPRSS11A silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.