Plásmido CRISPR de Activación (h) TLR3: sc-400512-ACT

TLR3 (receptor tipo Toll 3) es un receptor endosomal de reconocimiento de patrones que detecta ARN de doble cadena producido durante una infección viral o liberado por células dañadas. Tras la unión del ligando, TLR3 señaliza a través del adaptador TRIF para activar las vías de IRF3/IRF7 y NF-κB, impulsando la producción de interferón de tipo I y la expresión de citocinas proinflamatorias. Este eje de la inmunidad innata configura programas de restricción antiviral, la maduración de células dendríticas y la comunicación cruzada con la inmunidad adaptativa. La actividad desregulada de TLR3 se ha implicado en alteraciones de la defensa del huésped y en patología inflamatoria, lo que respalda su uso como nodo mecanístico en estudios de señalización de interferón, neuroinflamación e interacciones tumor‑inmunidad.

TLR3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TLR3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TLR3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TLR3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TLR3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TLR3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TLR3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TLR3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TLR3 en células tumorales con expresión de TLR3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.