Partículas Lentivirales de Activación (h) TIMP-1: sc-400408-LAC

TIMP1 codifica el inhibidor tisular de las metaloproteinasas-1 (TIMP-1), una glucoproteína secretada que se une a múltiples metaloproteinasas de la matriz e inhibe su actividad, regulando así el recambio de la matriz extracelular (MEC) y la proteólisis pericelular. Al modular la actividad de las MMP, TIMP-1 influye en la migración y adhesión celular, así como en la remodelación tisular, procesos que se entrecruzan con la señalización inflamatoria, los programas angiogénicos y las respuestas de cicatrización. TIMP-1 también participa en el equilibrio proteasa–inhibidor que modela la señalización dependiente de la MEC y puede afectar la disponibilidad de citocinas y la bioactividad de factores de crecimiento. La expresión desregulada de TIMP1 se ha asociado con fibrosis, contextos neuroinflamatorios y la remodelación del microambiente tumoral, lo que respalda su uso en estudios mecanísticos de la dinámica de la MEC y las interacciones célula–matriz.

Las partículas de activación lentiviral TIMP-1 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de TIMP1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral TIMP-1 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción TIMP1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de TIMP-1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo TIMP1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.