Plásmido CRISPR de Activación (h) TIMP-1: sc-400408-ACT

TIMP1 codifica el inhibidor tisular de metaloproteinasas 1 (TIMP-1), una glicoproteína secretada que se une e inhibe múltiples metaloproteinasas de la matriz (MMP) para regular el recambio de la matriz extracelular y la proteólisis pericelular. Al restringir la actividad de las MMP, TIMP-1 influye en la migración y la adhesión celular, así como en la remodelación tisular, y se integra en redes de señalización que acoplan la dinámica de la matriz con respuestas celulares, incluidos procesos inflamatorios y fibróticos. La desregulación de la expresión de TIMP1 se estudia con frecuencia en contextos de remodelación anómala de la matriz como la fibrosis, la inflamación crónica y la biología del microambiente tumoral, donde la alteración de la homeostasis de la MEC puede afectar fenotipos asociados a la invasión y la metástasis. Como gen ligado al cromosoma X y de expresión amplia, TIMP1 también sirve como un marcador útil para investigar el equilibrio proteasa–antiproteasa en diversos tipos celulares humanos.

TIMP-1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TIMP1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TIMP-1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TIMP1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TIMP1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TIMP-1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TIMP1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TIMP-1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TIMP-1 en células tumorales con expresión de TIMP1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.