Plasmide CRISPR d'Activation (h) Tie-1: sc-401506-ACT

TIE1 code Tie-1, un récepteur tyrosine kinase endothélial qui module la signalisation angiogénique et l’homéostasie vasculaire via des interactions avec l’axe Tie2/angiopoïétine et les voies PI3K–AKT et MAPK en aval. Tie-1 influence la survie des cellules endothéliales, l’intégrité des jonctions et les réponses aux forces de cisaillement, contribuant ainsi à la maturation et au remodelage des vaisseaux. Une expression ou une signalisation dérégulée de TIE1 a été associée à une néovascularisation pathologique, à une dysfonction vasculaire liée à l’inflammation et à l’angiogenèse associée aux tumeurs. En tant que régulateur enrichi dans le compartiment vasculaire, Tie-1 est fréquemment étudié en biologie endothéliale, perméabilité vasculaire et communication avec le microenvironnement dans des modèles de maladie.

Tie-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TIE1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Tie-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TIE1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TIE1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Tie-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TIE1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Tie-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Tie-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de TIE1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.