Plásmido CRISPR de Activación (h) TFIIB: sc-401174-ACT
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmdo de Activación CRISPR (h) TFIIB es un sistema de activación de la trascripción mediante una activación sinérgica (SAM), diseñado para incrementar la expresión de un gen concreto
- Los Plásmdo de Activación CRISPR (h) TFIIB incluyen los siguientes tres plásmidos, con un radio 1:1:1 : plásmido codificador de la nucleasa Cas 9 desactivada (dCas9), (D10A y N863A) fusionadas al dominio de transactivación VP64 y el gen de resistencia a blasticidina; plásmido codificador de la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 y el gen de resistencia a Higromicina; plásmido codificador de la secuencia diana específica de 20 nt de ARN y el gen de resistencia a puromicina.
- El complejo SAM resultante se une en un punto específico a unos 200 -250 nt aguas arriba del inicio de la transcripción del gen diana y ofrece un potente punto de reclutamiento de factores de transcripción para un eficiente incremento de la activación genica.
- Los gRNA codificados por el plásmido de activación CRISPR TFIIB (h) y el plásmido de activación CRISPR TFIIB (h2) se dirigen a regiones reguladoras distintas situadas aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción de GTF2B. Puede que haya uno o ambos diseños disponibles
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: TFIIB Anticuerpo (D-3): sc-271736
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido CRISPR de Activación (h) TFIIB | sc-401174-ACT | 20 µg | $397.00 |
GTF2B codifica el factor de transcripción humano IIB (TFIIB), un componente central del complejo de preiniciación de la ARN polimerasa II que ayuda a posicionar a la Pol II en los promotores y favorece la selección del sitio de inicio durante la transcripción basal. Al servir de puente entre las interacciones de TBP/TFIID, TFIIF y la Pol II, TFIIB contribuye a programas de transcripción regulada que controlan el ciclo celular, la diferenciación y la expresión génica en respuesta al estrés. La alteración de la maquinaria general de transcripción puede remodelar los transcriptomas globales y se ha asociado con estados transcripcionales oncogénicos y con una capacidad proliferativa modificada en múltiples sistemas modelo. Como regulador central del inicio por Pol II, TFIIB se estudia de forma habitual en el contexto de la arquitectura de promotores, el reclutamiento de factores de transcripción y el control de la expresión génica dependiente de la cromatina.
TFIIB El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GTF2B sin alterar la secuencia de ADN subyacente.
TFIIB El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GTF2B en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.
Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GTF2B, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TFIIB. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GTF2B y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TFIIB en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TFIIB en células tumorales con expresión de GTF2B silenciada o reducida.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.