Plásmido Doble Nickase (h) TET3: sc-414997-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)TET3 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa TET3 (h) y el plásmido de doble nickasa TET3 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a TET3. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: TET3 Anticuerpo (D-7): sc-518126
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) TET3 | sc-414997-NIC | 20 µg | $410.00 |
El TET3 humano codifica una dioxigenasa dependiente de Fe(II)/2-oxoglutarato que cataliza la oxidación iterativa de la 5-metilcitosina a 5-hidroximetilcitosina y a otros derivados, favoreciendo la desmetilación activa y pasiva del ADN. Esta actividad modela la programación epigenética, la accesibilidad de la cromatina y el control transcripcional durante el desarrollo temprano, la maduración neuronal y la reprogramación celular, y se integra con procesos asociados a la reparación del ADN y a la replicación. La hidroximetilación dependiente de TET3 desregulada se ha implicado en programas de expresión génica alterados observados en fenotipos del neurodesarrollo y en la biología tumoral, lo que la convierte en un objetivo relevante para estudios mecanísticos de la dinámica del epigenoma.
TET3 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus TET3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de TET3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de TET3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con TET3 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.