Plásmido Doble Nickase (h) TET2: sc-400545-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)TET2 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa TET2 (h) y el plásmido de doble nickasa TET2 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a TET2. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: TET2 Anticuerpo (C-7): sc-398535
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) TET2 | sc-400545-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) TET2 | sc-400545-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TET2 codifica una dioxigenasa dependiente de Fe(II)/2‑oxoglutarato que cataliza la oxidación de la 5‑metilcitosina a 5‑hidroximetilcitosina y a derivados posteriormente oxidados, promoviendo la desmetilación del ADN tanto activa como pasiva. A través de la regulación epigenética de potenciadores (enhancers) y de los cuerpos génicos, TET2 ayuda a coordinar la diferenciación hematopoyética, las decisiones de destino de las células inmunitarias y programas transcripcionales vinculados a la accesibilidad de la cromatina. La actividad de TET2 se cruza con procesos de reparación del ADN y de desmetilación asociada a la replicación, y está modulada por señales metabólicas que influyen en la disponibilidad de cofactores para la dioxigenasa. La alteración de la dinámica de metilación mediada por TET2 se asocia con frecuencia a cambios en la homeostasis de linajes mieloides y linfoides, y se estudia ampliamente en el contexto de la hematopoyesis clonal y de los mecanismos de las neoplasias hematológicas.
TET2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus TET2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de TET2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de TET2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con TET2 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.