TECK Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422841

Panoramica

Ccl25 codifica la chemiochina espressa dal timo (TECK), una chemiochina CC che segnala principalmente attraverso CCR9 per guidare la migrazione chemiotattica e il posizionamento dei leucociti CCR9+. Nel topo, TECK contribuisce al traffico delle cellule immunitarie all’interno dei microambienti timici e dei tessuti mucosali, modellando l’homing dei linfociti, la sorveglianza tissutale e l’organizzazione immunitaria regionale. La segnalazione a valle coinvolge vie dipendenti da GPCR, incluse le cascate PI3K/AKT e MAPK, che regolano motilità, adesione e rimodellamento del citoscheletro. Un’attività deregolata dell’asse Ccl25–CCR9 è stata implicata nell’infiltrazione immunitaria infiammatoria e in un’alterata localizzazione dei linfociti, aspetti rilevanti per modelli di infiammazione mucosale e di distribuzione delle cellule immunitarie associate al tumore.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TECK (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ccl25 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ccl25 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ccl25 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TECK.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ccl25 per lo studio della segnalazione di TECK, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ccl25 critici per la funzione di TECK
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ccl25 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TECK CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal TECK CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ccl25. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TECK Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR TECK (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ccl25 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ccl25 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.