Plasmide CRISPR d'Activation (h) TC-PTP: sc-403071-ACT

Le gène humain **PTPN2** code la phosphatase tyrosine protéique des lymphocytes T (**TC-PTP**), une PTP non réceptrice qui déphosphoryle des intermédiaires de signalisation afin de limiter les réponses aux cytokines et aux facteurs de croissance. TC-PTP est un régulateur négatif majeur de la signalisation **JAK/STAT** : elle module la phosphorylation des membres de la famille **STAT** et des kinases associées aux récepteurs, façonnant ainsi des programmes transcriptionnels qui contrôlent l’homéostasie immunitaire, la prolifération et les réponses au stress cellulaire. Grâce à des interactions (cross-talk) avec des voies en aval des récepteurs à activité tyrosine kinase et des signaux inflammatoires, **PTPN2** contribue à ajuster les seuils d’activation et l’inhibition par rétrocontrôle. Des études génétiques et fonctionnelles associent une activité ou une expression altérée de **PTPN2** à une dérégulation de la signalisation inflammatoire et à une susceptibilité accrue à des phénotypes immuno‑médiés et métaboliques, ce qui souligne sa large pertinence pour la recherche sur les mécanismes des maladies.

TC-PTP Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PTPN2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TC-PTP Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PTPN2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PTPN2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TC-PTP. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PTPN2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TC-PTP au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TC-PTP dans les cellules tumorales présentant une expression de PTPN2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.