TC-PTP Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403071-ACT

O PTPN2 humano codifica a fosfatase de tirosina proteica de células T (TC-PTP), uma PTP não receptora que desfosforila intermediários de sinalização para limitar as respostas a citocinas e fatores de crescimento. A TC-PTP é um regulador negativo fundamental da sinalização JAK/STAT, modulando a fosforilação de membros da família STAT e de quinases associadas a receptores, a fim de moldar programas transcricionais que controlam a homeostase imune, a proliferação e as respostas ao estresse celular. Por meio de crosstalk com vias a jusante de receptores tirosina-quinase e de sinais inflamatórios, o PTPN2 ajuda a calibrar os limiares de ativação e a inibição por feedback. Estudos genéticos e funcionais associam atividade ou expressão alteradas de PTPN2 à desregulação da sinalização inflamatória e à suscetibilidade a fenótipos imunomediados e metabólicos, sustentando sua ampla relevância para pesquisas sobre mecanismos de doença.

TC-PTP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PTPN2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TC-PTP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PTPN2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PTPN2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TC-PTP. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PTPN2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TC-PTP no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TC-PTP em células tumorais com expressão de PTPN2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.