TBX5 Lentiviral Activation Particles (m): sc-423282-LAC

Das Mausgen **Tbx5** kodiert **TBX5**, einen T-Box-Transkriptionsfaktor, der an sequenzspezifische DNA-Motive bindet, um während der embryonalen Entwicklung und der Gewebemusterung genregulatorische Programme zu koordinieren. TBX5 ist ein zentraler Determinant der Herzmorphogenese und der Festlegung der Vordergliedmaßen und integriert transkriptionelle Netzwerke, die die Differenzierung von Kardiomyozyten, die Kammerbildung und die Reifung des Reizleitungssystems steuern. Es wirkt im Zusammenspiel mit weiteren Linienfaktoren wie **NKX2-5** und **GATA**-Proteinen, um Enhancer zu regulieren, die strukturelle und elektrophysiologische Gene kontrollieren. Eine Fehlregulation der TBX5-Dosis oder -Aktivität ist mit angeborenen Herz- und Gliedmaßenfehlbildungen verknüpft und macht TBX5 zu einem wertvollen Knotenpunkt für die Untersuchung entwicklungsbiologischer Genregulation und von Genotyp-Phänotyp-Beziehungen in Mausmodellen.

TBX5 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Tbx5-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

TBX5 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Tbx5-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen TBX5-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Tbx5-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.