Plasmide CRISPR d'Activation (h) Tankyrase-1: sc-400749-ACT

TNKS code la tankyrase‑1, une polymérase poly(ADP‑ribose) (PARP) qui régule le renouvellement des protéines et les fonctions d’échafaudage via le recrutement de ligases d’ubiquitine dépendant de la PARylation. La tankyrase‑1 module la signalisation Wnt/β‑caténine en ciblant AXIN pour la dégradation, et contribue également au maintien des télomères, à la progression mitotique et aux réponses aux dommages de l’ADN par des interactions avec TRF1 et d’autres facteurs de réparation et du centrosome. En influençant la stabilité du génome et la signalisation proliférative, TNKS est fréquemment étudié dans des contextes de dérégulation de voies oncogéniques et d’instabilité chromosomique. Son vaste réseau de substrats en fait un nœud utile pour examiner les interactions entre la biologie des PARP, la protéostasie médiée par l’ubiquitine et le contrôle du cycle cellulaire.

Tankyrase-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TNKS sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Tankyrase-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TNKS dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TNKS, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Tankyrase-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TNKS natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Tankyrase-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Tankyrase-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de TNKS silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.