Plásmido CRISPR de Activación (m) Tafazzin: sc-426211-ACT

El gen **Taz** de ratón codifica la tafazzina, una transacilasa asociada a la membrana interna mitocondrial que remodela la cardiolipina y otros fosfolípidos para establecer una composición madura de las cadenas acilo. Este remodelado lipídico es fundamental para la eficiencia de la fosforilación oxidativa, la organización de las crestas mitocondriales y la regulación de la dinámica mitocondrial y la mitofagia bajo estrés energético. La alteración de la actividad de la tafazzina modifica la homeostasis de la cardiolipina, lo que provoca un deterioro de la función de la cadena de transporte de electrones y una mayor susceptibilidad al estrés metabólico, convirtiendo a **Taz** en un nodo clave de las vías de control de calidad mitocondrial. En investigación biomédica, **Taz** se estudia con frecuencia en el contexto del metabolismo lipídico mitocondrial, la bioenergética y la señalización dependiente de cardiolipina, relevantes para fenotipos neuromusculares y cardíacos.

Tafazzin El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Taz sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Tafazzin El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Taz en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Taz, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Tafazzin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Taz y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Tafazzin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Tafazzin en células tumorales con expresión de Taz silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.