Plásmido CRISPR de Activación (h) SUMO-2: sc-401111-ACT

El gen humano **SUMO2** codifica **SUMO-2**, un modificador similar a la ubiquitina que se conjuga covalentemente a proteínas diana en un ciclo dinámico de modificación postraduccional que regula la estabilidad proteica, la localización subcelular y el ensamblaje de complejos macromoleculares. La SUMOilación dependiente de SUMO-2 influye en la señalización y reparación del daño en el ADN, la organización de la cromatina, el control transcripcional y la progresión del ciclo celular mediante cascadas enzimáticas SUMO E1/E2/E3 y la desSUMOilación coordinada por proteasas SENP. SUMO-2 puede formar cadenas de poli-SUMO que interactúan con ligasas de ubiquitina dirigidas a SUMO, vinculando la SUMOilación con la proteostasis y las respuestas adaptativas al estrés. La actividad desregulada de SUMO2 y los patrones alterados de SUMOilación se estudian con frecuencia en contextos de señalización oncogénica, neurodegeneración y estrés inflamatorio, en los que se implican cambios a nivel de red en la transcripción y el mantenimiento del genoma.

SUMO-2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SUMO2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SUMO-2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SUMO2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SUMO2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SUMO-2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SUMO2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SUMO-2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SUMO-2 en células tumorales con expresión de SUMO2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.