Plasmide CRISPR/Cas9 KO Strumpellin (h): sc-402808

Présentation

WASHC5 code la strumpelline, un composant central indispensable du complexe WASH, qui régule la polymérisation de l’actine dépendante d’Arp2/3 sur les membranes endosomales. En coordonnant la tubulation et la fission des endosomes, la strumpelline soutient le tri et le recyclage des cargos associés au rétromère, influençant le trafic des récepteurs membranaires et des transporteurs de nutriments. L’activité de WASHC5 intègre le remodelage du cytosquelette aux voies endosome–membrane plasmique et endosome–Golgi, façonnant la migration cellulaire, l’intensité de la signalisation et l’homéostasie lysosomale. Des variations pathogènes de WASHC5 ont été associées à des phénotypes neurodégénératifs, notamment la paraplégie spastique héréditaire, soulignant sa pertinence pour l’étude du maintien neuronal et du stress lié au trafic membranaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Strumpellin (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène WASHC5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du WASHC5, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert WASHC5 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Strumpellin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en WASHC5 pour l'étude de la signalisation de Strumpellin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de WASHC5 essentiels à la fonction de Strumpellin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de WASHC5 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Strumpellin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Strumpellin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus WASHC5. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Strumpellin plasmide HDR (h) et le Strumpellin (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie WASHC5 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles WASHC5 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.