Stim1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401311

Descripción general

STIM1 codifica la molécula de interacción estromal 1 (Stim1), un sensor de Ca2+ del retículo endoplásmico que inicia la entrada de calcio operada por depósitos al acoplar el agotamiento de Ca2+ del RE con la activación de los canales ORAI en las uniones entre el RE y la membrana plasmática. Este influjo de Ca2+ regula la transcripción dependiente de NFAT, la remodelación del citoesqueleto, la secreción y redes más amplias de señalización dependiente de calcio que controlan la proliferación y las respuestas al estrés. Las vías dependientes de STIM1 son fundamentales para la activación de células inmunitarias y para otras funciones de células excitables y no excitables, vinculando la alteración de la homeostasis del calcio con fenotipos inmunológicos y otras formas de fisiopatología. En la biología de las enfermedades humanas, la señalización desregulada de STIM1 se estudia con frecuencia en el contexto de una entrada de Ca2+ anómala y de programas transcripcionales aguas abajo que afectan decisiones sobre el estado celular.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Stim1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen STIM1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del STIM1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de STIM1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Stim1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en STIM1 para la investigación de la señalización de Stim1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de STIM1 críticos para la función de Stim1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de STIM1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Stim1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Stim1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus STIM1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Stim1 (h) y el plásmido HDR Stim1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología STIM1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana STIM1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.