Stat5b CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400878-ACT

ヒトSTAT5Bは、JAKキナーゼを介してサイトカイン受容体および増殖因子受容体の下流で活性化されるシグナル依存性転写因子Stat5bをコードする。Stat5bはリン酸化によって二量体化し、核内へ移行する。Stat5bはリンパ球の発生、免疫恒常性、体の成長を制御する転写プログラムを調節し、JAK–STAT経路に加えてMAPKやPI3Kシグナルとのクロストークなど、複数の経路からの入力を統合する。STAT5B活性の異常は、サイトカイン応答性の変化や、免疫疾患および血液悪性腫瘍の生物学に関わる異常な細胞状態遷移と関連している。転写制御のハブとして、STAT5Bは増殖、分化、生存、系譜特異的遺伝子発現への影響の観点から広く研究されている。

Stat5b CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性STAT5Bの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Stat5b CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における STAT5B 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSTAT5B転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Stat5bの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSTAT5B遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるStat5b依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSTAT5B発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるStat5b経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。