Plásmido Doble Nickase (h) Stat5a: sc-400150-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)Stat5a consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Stat5a (h) y el plásmido de doble nickasa Stat5a (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a STAT5A. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Stat5a Anticuerpo (C-6): sc-271542
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) Stat5a | sc-400150-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) Stat5a | sc-400150-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
STAT5A codifica Stat5a, un factor de transcripción activado por citocinas que se fosforila aguas abajo de quinasas JAK tras la estimulación de receptores para interleucinas, la hormona del crecimiento, la prolactina y otras señales hematopoyéticas. El Stat5a activado dimeriza, se transloca al núcleo y regula programas génicos que controlan la proliferación, la supervivencia, la diferenciación y la homeostasis de las células inmunitarias, integrando el crosstalk con las vías de señalización PI3K–AKT y MAPK. La actividad de STAT5A se estudia con frecuencia en contextos de señalización de citocinas desregulada y control transcripcional alterado en neoplasias hematológicas y modelos de enfermedades mediadas por el sistema inmunitario. La perturbación de STAT5A permite diseccionar mecanismos de especificación de linaje, dependencia de citocinas y reorganización de redes transcripcionales en células humanas.
Stat5a El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus STAT5A en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de STAT5A. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de STAT5A. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con STAT5A alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.