Plásmido Doble Nickase (m) SPTLC1: sc-435265-NIC

Sptlc1 codifica la subunidad 1 de la base de cadena larga de la serina palmitoiltransferasa (SPTLC1), un componente central del complejo serina palmitoiltransferasa que cataliza el primer paso y el limitante de la velocidad en la biosíntesis de novo de esfingolípidos. Al controlar la producción de bases esfingoides y, aguas abajo, de ceramidas y esfingomielinas, SPTLC1 ayuda a regular la composición de membrana, la señalización lipídica y la función de los orgánulos, incluida la homeostasis del retículo endoplásmico (RE). La alteración de la actividad de SPTLC1 puede perturbar el flujo de esfingolípidos, afectando procesos como las respuestas al estrés, la fisiología mitocondrial y el mantenimiento neuronal. La desregulación de SPTLC1 está implicada en trastornos vinculados a desequilibrios de esfingolípidos, lo que respalda su uso en estudios mecanísticos del metabolismo lipídico y la neurobiología.

SPTLC1 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Sptlc1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Sptlc1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Sptlc1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Sptlc1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.