Plásmido Doble Nickase (m) SPRED2: sc-431133-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)SPRED2 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa SPRED2 (m) y el plásmido de doble nickasa SPRED2 (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Spred2. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) SPRED2 | sc-431133-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) SPRED2 | sc-431133-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Spred2 codifica SPRED2, una proteína adaptadora relacionada con Sprouty que regula negativamente la señalización de receptores tirosina cinasa al limitar la cascada RAS–RAF–MEK–ERK/MAPK. Al reclutar a neurofibromina (NF1) hacia RAS activado y al modular programas de fosforilación inducidos por factores de crecimiento, SPRED2 influye en la proliferación, diferenciación y migración celular en múltiples tejidos de ratón. La actividad desregulada de SPRED2 se ha relacionado con estados anómalos de señalización MAPK relevantes para fenotipos inflamatorios y contextos de señalización oncogénica, lo que la convierte en un nodo útil para estudiar la retroalimentación de la vía y el control de la amplitud de la señal. En modelos murinos, la perturbación de Spred2 se utiliza comúnmente para analizar respuestas transcripcionales dependientes de ERK y la interacción cruzada con redes de señalización de citocinas e inmunitarias.
SPRED2 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Spred2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Spred2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Spred2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Spred2 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.