SOAT2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-409713-ACT

Humanes SOAT2 (Sterol-O-Acyltransferase 2), auch als ACAT2 bekannt, ist ein im endoplasmatischen Retikulum lokalisiertes Enzym, das die Veresterung von Cholesterin mit langkettigem Fettsäure‑Acyl‑CoA zu Cholesterinestern katalysiert. Diese Reaktion unterstützt die intrazelluläre Cholesterinspeicherung, die Biogenese von Lipidtröpfchen und den Aufbau von Lipoproteinen und verknüpft die SOAT2‑Aktivität mit der Sterolhomöostase sowie umfassenderen Netzwerken des Lipidstoffwechsels. SOAT2 wirkt an der Schnittstelle von Cholesterintransport, intestinaler Resorption und hepatischer Lipidverarbeitung und beeinflusst Signal- und Stoffwechselwege, die die Membranzusammensetzung und die Pufferung neutraler Lipide steuern. Eine dysregulierte Cholesterinester‑Metabolisierung und veränderte SOAT2‑Expression wurden mit für metabolische und kardiovaskuläre Erkrankungen relevanten Phänotypen in Verbindung gebracht, was SOAT2 zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Studien zu lipidgetriebenem zellulärem Stress und Remodelling macht.

SOAT2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SOAT2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

SOAT2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SOAT2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SOAT2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen SOAT2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SOAT2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von SOAT2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des SOAT2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SOAT2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.