Plásmido CRISPR de Activación (h) SNX9: sc-403578-ACT

SNX9 humano (sorting nexin 9) es un adaptador con dominio PX-BAR que vincula el reconocimiento de fosfoinosítidos con la remodelación de membranas y la dinámica de la actina. Actúa en la endocitosis mediada por clatrina coordinando los componentes AP-2/clatrina con la escisión de vesículas dependiente de dinamina y acoplando los sitios endocíticos a la polimerización de actina impulsada por Arp2/3 mediante interacciones con N-WASP y factores relacionados. A través de estas funciones, SNX9 contribuye a la internalización de receptores, el tráfico intracelular y la atenuación de señales, influyendo en vías como EGFR y otras redes de señalización ligadas a RTK. La expresión o función alteradas de SNX9 se han asociado con desregulación del tráfico vesicular y estados de señalización observados en contextos de cáncer y enfermedades neurobiológicas, lo que lo convierte en un nodo útil para estudios mecanísticos de la señalización vinculada a la endocitosis.

SNX9 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SNX9 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SNX9 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SNX9 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SNX9, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SNX9. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SNX9 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SNX9 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SNX9 en células tumorales con expresión de SNX9 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.