Plásmido CRISPR de Activación (h) SMC1α: sc-402865-ACT

SMC1A codifica la proteína 1α de mantenimiento estructural de los cromosomas (SMC1α), un componente central del complejo cohesina que controla la cohesión entre cromátidas hermanas, la segregación cromosómica y la organización de la cromatina de orden superior. Mediante la extrusión de bucles de ADN dependiente de cohesina y su coordinación con CTCF, SMC1α influye en la regulación transcripcional, el momento de replicación del ADN y el mantenimiento de la estabilidad del genoma. SMC1α también participa en la señalización y reparación del daño en el ADN, respaldando las respuestas de los puntos de control ante el estrés replicativo y las roturas de doble cadena. La desregulación o mutación de SMC1A y de componentes de la vía de la cohesina se asocia con cohesinopatías y se ha implicado en inestabilidad genómica y en programas de expresión génica alterados relevantes para la biología del cáncer.

SMC1α El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SMC1A sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SMC1α El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SMC1A en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SMC1A, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SMC1α. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SMC1A y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SMC1α en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SMC1α en células tumorales con expresión de SMC1A silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.