Date published: 2026-7-20

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SMARCA4/Brg1 Plasmide Double Nickase (m): sc-423026-NIC

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Schede Tecniche
  • Specie Target: mouse
  • 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
  • SMARCA4/Brg1 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
  • Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
  • Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
  • Il SMARCA4/Brg1 Double Nickase Plasmid (m) e il SMARCA4/Brg1 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Smarca4. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
  • In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: SMARCA4/Brg1 Antibody (G-7): sc-17796
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    SMARCA4/Brg1 Plasmide Double Nickase (m)

    sc-423026-NIC
    20 µg
    $410.00

    SMARCA4/Brg1 Plasmide Double Nickase (m2)

    sc-423026-NIC-2
    20 µg
    $410.00

    Il gene murino **Smarca4** codifica **SMARCA4/Brg1**, la subunità catalitica ATPasica dei complessi di rimodellamento della cromatina **SWI/SNF (BAF)**, che riposizionano i nucleosomi per regolare l’accessibilità di promotori ed enhancer. Attraverso un rimodellamento della cromatina dipendente dall’ATP, SMARCA4 si integra con programmi trascrizionali che controllano la progressione del ciclo cellulare, la specificazione di linea, la replicazione del DNA e le risposte al danno al DNA. La funzione di SMARCA4/Brg1 interseca vie regolate dalla repressione Polycomb, dalla segnalazione di p53 e da fattori di trascrizione dello sviluppo, plasmando stati epigenetici nei diversi tessuti. La deregolazione dei componenti di SWI/SNF, incluso SMARCA4, è implicata nella trasformazione oncogena e in fenotipi dello sviluppo, rendendo **Smarca4** un bersaglio centrale per studi meccanicistici della regolazione genica basata sulla cromatina.

    SMARCA4/Brg1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Smarca4 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Smarca4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Smarca4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

    Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Smarca4 interrotto.

    Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.