SMARCA4/Brg1 Plasmide Double Nickase (m): sc-423026-NIC

Il gene murino **Smarca4** codifica **SMARCA4/Brg1**, la subunità catalitica ATPasica dei complessi di rimodellamento della cromatina **SWI/SNF (BAF)**, che riposizionano i nucleosomi per regolare l’accessibilità di promotori ed enhancer. Attraverso un rimodellamento della cromatina dipendente dall’ATP, SMARCA4 si integra con programmi trascrizionali che controllano la progressione del ciclo cellulare, la specificazione di linea, la replicazione del DNA e le risposte al danno al DNA. La funzione di SMARCA4/Brg1 interseca vie regolate dalla repressione Polycomb, dalla segnalazione di p53 e da fattori di trascrizione dello sviluppo, plasmando stati epigenetici nei diversi tessuti. La deregolazione dei componenti di SWI/SNF, incluso SMARCA4, è implicata nella trasformazione oncogena e in fenotipi dello sviluppo, rendendo **Smarca4** un bersaglio centrale per studi meccanicistici della regolazione genica basata sulla cromatina.

SMARCA4/Brg1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Smarca4 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Smarca4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Smarca4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Smarca4 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.