SLUG CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400389-ACT

Humanes **SNAI2** codiert den Zinkfinger-Transkriptionsfaktor **SLUG**, einen zentralen Regulator der epithelial–mesenchymalen Transition (EMT), der epitheliale Adhäsionsprogramme reprimiert und zugleich mesenchymale Eigenschaften, Motilität und die Plastizität von Zellzuständen fördert. SLUG integriert Signale aus Signalwegen wie **TGF-β**, **WNT/β-Catenin**, **NOTCH** und Rezeptor-Tyrosinkinasen, um transkriptionelle Netzwerke zu koordinieren, die Differenzierung, Migration und Überleben unter Stress steuern. Eine veränderte SNAI2-Aktivität ist mit Phänotypen der Tumorprogression verbunden, darunter Invasion und metastasenähnliches Verhalten, und wurde zudem in verschiedenen Krebsarten mit Therapieresistenz sowie der Aufrechterhaltung stammzellähnlicher Subpopulationen in Zusammenhang gebracht. Über die Onkologie hinaus trägt SLUG zu Entwicklungsprozessen und Gewebeumbau bei und ist damit ein nützlicher Knotenpunkt, um die transkriptionelle Kontrolle von Zelllinienschicksalsentscheidungen und zellulären Übergängen zu untersuchen.

SLUG Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SNAI2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

SLUG Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SNAI2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SNAI2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen SLUG-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SNAI2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von SLUG-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des SLUG-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SNAI2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.