SLAIN2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-429242-ACT

Slain2 codifica a SLAIN2, um adaptador associado ao rastreamento da extremidade “plus” dos microtúbulos, que coopera com proteínas EB e com o complexo ch-TOG/XMAP215 para promover o crescimento persistente de microtúbulos e coordenar a organização do citoesqueleto. Ao regular a dinâmica dos microtúbulos, a SLAIN2 influencia o transporte intracelular, a polaridade celular e a função do fuso mitótico — processos centrais para a morfogênese neuronal e o controle proliferativo. A perturbação de redes regulatórias de microtúbulos pode comprometer o crescimento axonal e a conectividade sináptica, e também afetar a estabilidade cromossômica por alterações na montagem do fuso. Para a pesquisa biomédica em camundongos, Slain2 oferece um ponto de entrada acessível para estudar como a regulação da extremidade “plus” dos microtúbulos se conecta à progressão do ciclo celular e a programas de diferenciação.

SLAIN2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Slain2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SLAIN2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Slain2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Slain2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SLAIN2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Slain2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SLAIN2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SLAIN2 em células tumorais com expressão de Slain2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.