Plasmide CRISPR d'Activation (h) Six1: sc-402063-ACT

SIX1 code pour Six1, un facteur de transcription à homéoboîte qui régule des programmes du développement embryonnaire, notamment l’organogenèse, la myogenèse et la formation des placodes sensorielles, en coordonnant des réseaux d’expression génique spécifiques de lignée. Six1 agit au sein de circuits de régulation transcriptionnelle interfacés avec des voies de signalisation du développement telles que WNT, FGF et TGF-β, orientant les décisions de destinée cellulaire, la prolifération et la différenciation. Dans les tissus adultes, une expression dérégulée de SIX1 peut favoriser des états transcriptionnels aberrants liés à la transition épithélio-mésenchymateuse, à des programmes associés à l’invasion et à une régulation altérée du cycle cellulaire. En conséquence, SIX1 est largement étudié comme moteur de la réactivation de gènes du développement en cancérologie et comme déterminant de phénotypes de différenciation spécifiques des tissus.

Six1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SIX1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Six1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SIX1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SIX1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Six1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SIX1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Six1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Six1 dans les cellules tumorales présentant une expression de SIX1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.