SETX Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402354

Descripción general

SETX (senataxina) codifica una helicasa de ADN/ARN que resuelve los bucles R (R-loops) y otras estructuras secundarias de ácidos nucleicos que surgen durante la transcripción, coordinando así la elongación transcripcional con el mantenimiento del genoma. Actúa en la interfaz entre la respuesta al daño del ADN acoplada a la transcripción, el control del estrés replicativo y el procesamiento de ARN, ayudando a limitar las roturas de doble cadena y la recombinación aberrante en loci activamente transcritos. La actividad de SETX se vincula a vías que involucran a la ARN polimerasa II, factores de reparación del ADN y la vigilancia de complejos de transcripción detenidos. La desregulación o mutación de SETX se asocia con fenotipos neurodegenerativos y síndromes de inestabilidad genómica, lo que la convierte en un objetivo relevante para estudios mecanísticos del daño del ADN asociado a la transcripción y de la vulnerabilidad neuronal.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO SETX (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen SETX en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del SETX junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de SETX tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína SETX.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en SETX para la investigación de la señalización de SETX, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de SETX críticos para la función de SETX
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de SETX para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido SETX CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido SETX CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus SETX. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR SETX (h) y el plásmido HDR SETX (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología SETX para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana SETX definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.