SENP5 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404428-ACT

Das humane SENP5 kodiert eine SUMO-spezifische Protease, die die DeSUMOylierung sowie die Prozessierung von SUMO-Vorläufern katalysiert und dadurch zur Aufrechterhaltung der SUMO-Homöostase in nukleären und mitochondrienassoziierten Prozessen beiträgt. Durch die Rückgängigmachung der SUMO-Konjugation an wichtigen Substraten beeinflusst SENP5 die Zellzyklusprogression, die Organisation des mitotischen Spindelapparats, DNA-Schadensantworten und stressadaptive Transkriptionsprogramme. Die SENP5-Aktivität ist über den SUMO-Signalweg mit der Regulation von Proteinstabilität und subzellulärer Lokalisation verknüpft und überschneidet sich mit ubiquitinabhängigem Abbau sowie chromatinassoziierter Signalgebung. Eine fehlregulierte Funktion von SUMO-Proteasen, einschließlich veränderter SENP5-Expression oder -Aktivität, wurde in experimentellen Modellen mit aberranter Proliferation, genomischer Instabilität und krebsrelevanten Signalphänotypen in Zusammenhang gebracht.

SENP5 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SENP5-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

SENP5 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SENP5-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SENP5-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen SENP5-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SENP5-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von SENP5-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des SENP5-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SENP5-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.