SEMA6C CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422889

概要

Sema6cは、クラス6セマフォリンであるSEMA6Cをコードしており、組織パターニングの過程で接触依存的なシグナル伝達を制御する膜貫通型のガイダンス因子です。SEMA6Cはプレキシン受容体との相互作用と、それに伴うRhoファミリーGTPアーゼシグナル伝達を介して、細胞骨格の再編成、細胞極性、細胞移動、神経突起の伸長に影響を与えます。セマフォリン–プレキシン経路は軸索路の形成やシナプス結合にも関与するとされ、セマフォリンシグナルの変調はモデル系において神経発生・神経変性に関連する表現型と結び付けられています。さらに、SEMA6ファミリーのメンバーは血管系および免疫細胞の挙動を調節し得ることから、発生や炎症関連の文脈における細胞間コミュニケーションの解明に向けた研究対象としても重要です。

SEMA6C CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるSema6c遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Sema6c内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Sema6cのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、SEMA6Cタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、SEMA6Cシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Sema6c欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• SEMA6Cの機能に不可欠なSema6cエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Sema6cゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• SEMA6C CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびSEMA6C CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Sema6c遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  SEMA6C HDRプラスミド（m）および SEMA6C HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSema6cホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSema6c標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。