Plásmido CRISPR de Activación (h) SELH: sc-415276-ACT

El gen humano **SELENOH** codifica la selenoproteína H (SELH), una proteína redox activa asociada al núcleo que participa en el mantenimiento de la homeostasis redox celular mediante procesos antioxidantes dependientes de tioles. SELH contribuye a la respuesta celular frente al estrés oxidativo y respalda programas transcripcionales que influyen en la integridad del ADN, la función mitocondrial y la proteostasis bajo condiciones de desafío redox. Como parte de la red más amplia de selenoproteínas que vincula el metabolismo del selenio con el control de las especies reactivas de oxígeno, la alteración de la actividad de SELH es relevante para los mecanismos subyacentes a la neurodegeneración, la disfunción metabólica y la biología tumoral, donde la señalización oxidativa y la adaptación al estrés se encuentran perturbadas.

SELH El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SELENOH sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SELH El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SELENOH en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SELENOH, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SELH. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SELENOH y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SELH en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SELH en células tumorales con expresión de SELENOH silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.