secretin receptor Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403329-ACT

SCTR codifica o receptor humano da secretina, um receptor acoplado à proteína G da classe B que se liga ao hormônio peptídico gastrointestinal secretina para regular a secreção epitelial de fluidos e bicarbonato, a função do ducto pancreático e a fisiologia biliar. Após a ligação do ligante, o SCTR acopla-se principalmente à proteína Gs para estimular a adenilil ciclase, elevar os níveis de cAMP e ativar programas de transcrição e de transporte iônico dependentes de PKA, com sinalização adicional dependente do contexto por vias de cálcio e MAPK. A atividade do receptor contribui para a homeostase digestiva e metabólica coordenada e é frequentemente estudada em epitélios secretores e em contextos neuroendócrinos. Alterações na sinalização de GPCR/cAMP envolvendo o SCTR têm sido investigadas em modelos de disfunção pancreática e biliar, distúrbios gastrointestinais e biologia tumoral responsiva a hormônios, como um mecanismo que influencia a secreção celular, a proliferação e a diferenciação.

secretin receptor O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SCTR sem alterar a sequência de ADN subjacente.

secretin receptor O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SCTR em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SCTR, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de secretin receptor. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SCTR nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de secretin receptor no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via secretin receptor em células tumorais com expressão de SCTR silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.