Plásmido CRISPR de Activación (h) Sec6: sc-405053-ACT

El gen humano **EXOC3** codifica **Sec6**, una subunidad esencial del complejo de anclaje **exocisto**, que coordina el direccionamiento y el acoplamiento de vesículas secretoras en dominios específicos de la membrana plasmática. Sec6 favorece la exocitosis polarizada, el tráfico de membranas y la coordinación del citoesqueleto, influyendo en procesos como la migración celular, el crecimiento de neuritas y la polaridad epitelial. A través de su papel en el anclaje de vesículas, la función de EXOC3 se cruza con vías que regulan el reciclaje de receptores y la secreción regulada, las cuales moldean las salidas de señalización. La desregulación del tráfico mediado por el exocisto se ha asociado con alteraciones de la polaridad celular y fenotipos invasivos, lo que convierte a EXOC3 en un punto de entrada útil para estudiar mecanismos dependientes de la secreción en modelos relevantes para enfermedades.

Sec6 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de EXOC3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Sec6 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus EXOC3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional EXOC3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Sec6. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo EXOC3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Sec6 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Sec6 en células tumorales con expresión de EXOC3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.