Plasmide CRISPR/Cas9 KO SEC24A (m): sc-429522

Présentation

Sec24a code SEC24A, un composant central du manteau COPII qui sélectionne les cargaisons et assure le transport antérograde du réticulum endoplasmique vers l’appareil de Golgi. En s’associant à SEC23 et en interagissant avec des adaptateurs de cargaison, SEC24A contribue à réguler le trafic sécrétoire, la protéostasie du RE et l’homéostasie membranaire, qui influencent la gestion des lipides et la composition des récepteurs à la surface cellulaire. La perturbation de l’export dépendant de COPII peut déclencher des réponses au stress du RE et modifier l’acheminement de la matrice extracellulaire et de molécules de signalisation, reliant ainsi la fonction de SEC24A à des voies qui gouvernent le métabolisme et l’homéostasie tissulaire. Chez la souris, Sec24a a été utilisé pour étudier comment l’empaquetage sélectif des cargaisons affecte la biologie systémique des lipides et des lipoprotéines, ainsi que des phénotypes plus larges de la voie sécrétoire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SEC24A (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Sec24a dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Sec24a, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Sec24a à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SEC24A.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Sec24a pour l'étude de la signalisation de SEC24A, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Sec24a essentiels à la fonction de SEC24A
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Sec24a pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SEC24A plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le SEC24A plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Sec24a. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SEC24A plasmide HDR (m) et le SEC24A (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Sec24a pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Sec24a définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.