Plásmido CRISPR de Activación (h) SEC23: sc-403549-ACT

El gen humano **SEC23A** codifica **SEC23**, un componente esencial del recubrimiento **COPII** que media la gemación de vesículas desde los sitios de salida del retículo endoplásmico y la selección de carga para el transporte del RE al Golgi. SEC23 se coordina con SEC24 y la GTPasa SAR1 para impulsar el ensamblaje del recubrimiento, contribuyendo al flujo de la vía secretora, la proteostasis y la correcta maduración de la matriz extracelular y de proteínas de membrana. La alteración del tráfico COPII puede modificar la glicosilación, las respuestas al estrés del RE y redes de señalización dependientes de la secreción, importantes en el desarrollo y la homeostasis tisular. Variantes patogénicas de SEC23A se han vinculado con fenotipos craneofaciales y esqueléticos, lo que convierte a SEC23A en un nodo útil para estudiar mecanismos de enfermedad relacionados con la secreción en modelos de células humanas.

SEC23A El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SEC23A sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SEC23A El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SEC23A en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SEC23A, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SEC23A. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SEC23A y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SEC23A en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SEC23A en células tumorales con expresión de SEC23A silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.