Partículas Lentivirales de Activación (m) SAV1: sc-425662-LAC

Sav1 codifica la proteína 1 de la familia Salvador que contiene un dominio WW (SAV1), un componente andamiaje de la vía Hippo que coordina la señalización de las quinasas MST1/2–LATS1/2 para restringir la transcripción dependiente de YAP/TAZ. En células de ratón, SAV1 contribuye al control de la proliferación, la apoptosis y el crecimiento tisular al promover la retención citoplasmática y la degradación de YAP/TAZ dependientes de fosforilación. A través de estas funciones, Sav1 favorece la inhibición por contacto y la homeostasis del tamaño de los órganos, y se interrelaciona con la dinámica del citoesqueleto y la señalización en uniones celulares que influyen en las decisiones de destino celular. La desregulación de la señalización de la vía Hippo y la actividad alterada de SAV1 son ampliamente relevantes en modelos de hiperproliferación, transición epitelio-mesénquima y biología de supresores tumorales en sistemas de mamíferos.

Las partículas de activación lentiviral SAV1 (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Sav1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral SAV1 (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Sav1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de SAV1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Sav1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.