Plásmido CRISPR de Activación (h) SAP 145: sc-403214-ACT

SF3B2 codifica SAP 145, un componente central del subcomplejo SF3b dentro de la ribonucleoproteína nuclear pequeña U2, que favorece el ensamblaje del espliceosoma y el reconocimiento preciso del punto de ramificación durante el corte y empalme del pre-ARNm. Al coordinar la selección de sitios de empalme y la definición de exones, SAP 145 sostiene la integridad del transcriptoma e influye en procesos posteriores, como la progresión del ciclo celular, las respuestas al daño del ADN y los programas de expresión génica adaptativos al estrés. La función desregulada de factores del espliceosoma puede desplazar el equilibrio de isoformas y alterar la expresión de vías que controlan la proliferación y la apoptosis, lo que convierte a SF3B2 en un nodo útil para estudiar mecanismos de procesamiento anómalo del ARN en contextos relevantes para la enfermedad.

SAP 145 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SF3B2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SAP 145 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SF3B2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SF3B2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SAP 145. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SF3B2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SAP 145 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SAP 145 en células tumorales con expresión de SF3B2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.