S-100P Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404366-ACT

O S100P humano codifica a S-100P, uma pequena proteína ligadora de cálcio do tipo EF-hand que atua como adaptador de sinalização, conectando fluxos de cálcio a alterações na dinâmica do citoesqueleto, no controle do ciclo celular e em programas transcricionais responsivos ao estresse. Relata-se que a S-100P interage com receptores e centros de sinalização como o RAGE, influenciando vias associadas a MAPK e NF-κB que modulam fenótipos de adesão, migração e sobrevivência. A expressão desregulada de S100P foi observada em múltiplas neoplasias epiteliais e é frequentemente estudada como marcador de progressão tumoral e potencial metastático. Além disso, a biologia da S-100P é relevante para o remodelamento tecidual associado à inflamação, no qual a sinalização dependente de cálcio se cruza com sinais da matriz extracelular e do sistema imune.

S-100P O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de S100P sem alterar a sequência de ADN subjacente.

S-100P O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus S100P em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição S100P, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de S-100P. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus S100P nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de S-100P no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via S-100P em células tumorais com expressão de S100P silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.