Plásmido Doble Nickase (h) RNF213: sc-418450-NIC

RNF213 codifica una gran ligasa E3 de ubiquitina que contiene un dominio tipo RING finger y una ATPasa AAA+, que contribuye a la regulación dependiente de ubiquitina del recambio proteico y de la señalización en respuesta al estrés. RNF213 se ha implicado en vías que coordinan la homeostasis endotelial y vascular, la señalización inflamatoria y las respuestas celulares a la hipoxia y al estrés metabólico, en consonancia con funciones en el remodelado angiogénico. La variación genética y la alteración de la función de RNF213 se asocian fuertemente con la enfermedad de Moyamoya y otros fenotipos cerebrovasculares y vasculopáticos, lo que impulsa estudios mecanísticos en modelos celulares humanos relevantes. Además, la actividad de RNF213 se ha vinculado a la modulación de vías de la inmunidad innata, lo que la convierte en un nodo útil para analizar la comunicación cruzada entre la ubiquitinación, la inflamación y la biología vascular.

RNF213 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus RNF213 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de RNF213. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de RNF213. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con RNF213 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.