Rieske FeS Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403504-ACT

UQCRFS1 codifica a proteína ferro-enxofre do tipo Rieske, uma subunidade catalítica essencial do complexo III mitocondrial (citocromo bc1) que transfere elétrons do ubiquinol para o citocromo c por meio do seu cluster 2Fe–2S. Essa atividade sustenta a fosforilação oxidativa, a manutenção do potencial de membrana mitocondrial e o acoplamento do transporte de elétrons à translocação de prótons. Ao influenciar a eficiência da cadeia respiratória, UQCRFS1 contribui para a produção celular de ATP, a homeostase redox e a sinalização mitocondrial por espécies reativas de oxigênio (ROS). A desregulação da função do complexo III e alterações na expressão de UQCRFS1 têm sido associadas a estresse bioenergético mitocondrial, com relevância para pesquisas em doenças neurodegenerativas, cardiovasculares e metabólicas.

Rieske FeS O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de UQCRFS1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Rieske FeS O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus UQCRFS1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição UQCRFS1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Rieske FeS. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus UQCRFS1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Rieske FeS no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Rieske FeS em células tumorais com expressão de UQCRFS1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.